以AcSDKP为先导结构，打算并合成具有化学损害防护活性的多肽化合物。【顺序】聘请固相多肽合成或液相顺序取得方针产物，触及的结构改造神气主要有C结尾的修饰、N结尾的修饰、侧链修饰与残基的位点改造等。【成果】17个方针产物结构经LC-MS分析解释，相对分子质料与表面值一致；粗产物经RP-HPLC分离分析，纯度达到95%以上。【论断】通过本打算与合成工作，为建造具有化学损害保护活性的新药提供实验依据。
关节词：AcSDKP；化学损害防护；结构改造
化学和辐射损害防护剂的规划最早运转于冷战期间，由好意思国Walter Reed陆军军事规划所从4 400种化学物资中筛选取得，于今仍被觉得是最有用的防护剂之一［1］。武警部队肩负着执勤、处突、反恐的特殊职能责任，与化学危境品、辐照线等战争的契机日益增多，遭遇化学或辐射损害的可能性也随之增多。规划现场化学或辐射损害驻防以及救急药品、材料装备等，关于提高武警部队粗疏突发事件的救援智商和后勤保险智商意念念要紧。建造新式、高效、低毒的化学或辐射防护药物仍是成为军事医学防护的规划重心。Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro（AcSDKP）是东说念主体胸腺素β4氨基端的四肽段，具有极高的保护造血干细胞免受辐照、化学品、热及光辐射损害的活性［2］。但阻难其胜仗通过临床实验的主要原因是在体内剖析太快，药效作用期间短。本规划以AcSDKP为先导物，进行结构修饰与改造，达到保抓活性、挣扎酶降解、提高生物利费用的方针，为寻找新式造血干细胞保护剂，用于化学或辐射损害的驻防提供实验依据。
张开剩余86%1 实验顺序依据已有的构效关系规划［3］，本规划以AcSDKP为先导物打算合成了17个直链型多肽改造物。先导物结构见图1。
图1 Ac-SDKP的结构
1.1实验打算 打算、合成的17个方针化合物，其中触及的主要改造神气如下：（1）C结尾的修饰，包括酿成多种类型肽酰胺和肽酯。（2）N结尾的修饰，包括引入不同的酰化基团如Ac、Fmoc、Sal、Tar和对羟基苯甲酰等。（3）侧链修饰与残基的位点结构改造，包括保留残基侧链保护基、同性氨基酸替换、引入非自然氨基酸取代等。其中液相顺序合成了化合物a～k，l～q为固投合成顺序取得，见图2。
1.2 实验顺序
1.2.1 液相法合成肽的顺序（1）HCl/EtOAc顺序脱Boc保护基：将Boc保护的肽投于圆底烧瓶中，在冰水外浴下加入4.0 mol/L HCl/EtOAc溶液熔解原料，充分搅动响应，TLC监测响应全皆，减压浓缩至干，以无水酒精、甲苯反复抽带几次，得到固体或油状物，用无水Et2O或EtOAc充分研磨，抽滤，洗涤，干燥。经进一步纯化惩办，得到居品。（2）EDC/HOBt法合成肽：将等摩尔的N保护羧基组分与脱除Boc保护的氨基组分的盐酸盐溶于极少干燥的DMF，加入等摩尔的HOBt，冰盐外浴降温至-16℃以下，在搅动下渐渐滴加用等摩尔DIEA或TEA中庸过的EDC盐酸盐的DMF溶液，低温响应0.5～1 h后，室温络续响应6～10 h，TLC监测至响应全皆。向响应液中加入过量的足够食盐水（约7倍量），充分搅动，使产物千里淀出来，用EtOAc萃取3次，统一的有机层轮番用1 mol/L盐酸水溶液、水、5%的碳酸氢钠溶液、水、足够食盐水，各洗涤3次，无水硫酸钠干燥后，过滤，减压浓缩滤液，经合适溶剂研磨、重结晶或柱层析进一步纯化。（3）Zn/HOAc修起脱除OPac酯保护：将羧基端OPac酯保护的肽原料用适量的冰醋酸熔解于三颈瓶，在40～50℃的条款下，加入过量的锌粉（约50倍量），搅动响应2～4 h，TLC监测至响应全皆，过滤去除过量的锌粉，滤液减压浓缩至干得到固体或油状物，轮番用冷的1 mol/L的盐酸水溶液、水和乙醚洗涤，然后干燥惩办。得到的粗品不错聘请重结晶或柱层析进一步纯化。
图2 AcSDKP繁衍物的结构打算
a）～k）：液相顺序合成化合物；l）～q）：固相顺序合成化合物
1.2.2 固相肽合成顺序（1）Boc-AA1-OH与氯甲基树脂的键合：Boc-AA1-OH（20 mmol）、K2CO32.76 g（20 mmol）、KI 5mg及氯甲基树脂10 g（5 mmol）（取代当量0.5 mmol/g，粒度100～200目，交联度1%）共同与100 ml DMF混和，经70℃空气浴旋转加热响应25 h。然后将响应混悬液移入带抽滤砂板的肽响应管中，抽除上清液。树脂经下列溶剂轮番洗滤：DMF（60～70℃）×3、热95%EtOH×3、1 mol/L盐酸×2、95%EtOH×1、（热DMF×2、热95%EtOH×2）×2、热95%EtOH×3、EtOAc×2、无水Et2O×1，抽干，取出树脂，红外灯下干燥3～6 h，称重计较增重和收率。（2）脱除Boc：将Boc-AA-树脂（1 mmol）置于肽响应管内，加入10 ml 3.0 mol/L HCl/HOAc，密封上口，于室温中摇动5 min，抽除溶液，再加入3.0 mol/L HCl/HOAc，于室温中摇动40 min，抽除酸液，树脂轮番用下列溶剂洗滤：DCM×2、95%EtOH×3、DMF×2、95%EtOH×2、6%TEA/EtOAc×2、DMF×2、50%EtOH×2、DMF×2、95%EtOH×4、EtOAc×1、无水Et2O×1，抽干备用。（3）脱除Fmoc：Fmoc-AA-树脂与适量20%哌啶/DMF混摇2次，迪士尼彩乐园稳定吗3 min+30 min，轮番用 DMF×3、EtOAc×2、95%EtOH×2、50%EtOH×2、DMF×2、95%EtOH×5、EtOAc×1、无水Et2O×1，抽干备用。（4）羧基组分Boc-AA-OH或Fmoc-AA-OH的活化：称取3倍于树脂上氨基组分的Boc（或Fmoc）-AA-OH、HBTU及HOBt共溶于适量的干燥DMF中，然后加入4倍摩尔量（当氨基组分为HCl盐时）或3倍摩尔量（当氨基组分为游离胺时）的NMM。溶液表示全溶后备用。（5）缩合接肽：将上述预制的羧基组分活化溶液与适量的氨基组分树脂羼杂，室温摇动响应，特别由茚三酮磨真金不怕火成签订定，每次缩合5～6 h。响应后树脂轮番用下列溶剂淋洗：DMF×3、95%EtOH×3、DMF×2、95%EtOH×3、EtOAc×1、无水Et2O×1。抽干，待下一轮回脱Boc或脱Fmoc用。（6）脱除N结尾及侧链上的保护：全序列肽树脂的N端保护基（Boc或Fmoc）的脱除条款与顺序（2）、（3）换取；侧链上保护基tBu、Boc用TFA/thioanisole/H2O（90∶5∶5）羼杂液惩办2次（5 min及40 min），成例洗滤；侧链上的Trt保护基用TFA/Et3SiH/DCM（5∶5∶90）惩办2次（各10 min），成例洗滤。（7）氨解响应切除树脂：将肽树脂先用6%TEA/DMF惩办2次（各2 min）进行中庸，随后成例洗滤。终末按10 ml/g（树脂）的比例将胺溶液与等体积的THF羼杂于树脂管中。上盖封严后，频频摇动，室温24 h或合适延迟氨解期间。采集滤液，残余树脂用60℃95%EtOH洗滤3次，统一滤液在55℃下减压浓缩至干，再加入甲苯蒸干。残留物经无水Et2O研磨成粉状，过滤采集千里淀，得粗产物，进一步分离纯化。
2 结 果2.1 质谱分析
化合物a：ESI-MS（m/z）：696.3［M+H］+；化合物b：ESI-MS（m/z）：438.2［M+H］+；化合物 c：ESI-MS（m/z）：660.3［M+H］+；化合物d：ESI-MS（m/z）：558.3［M+H］+；化合物e：ESI-MS（m/z）：816.4［M+H］+；化合物 f：ESI-MS（m/z）：830.4［M+H］+；化合物 g：ESI-MS（m/z）：728.8［M+H］+；化合物h：ESI-MS（m/z）：459.3［M+H］+；化合物i：ESI-MS（m/z）：681.3［M+H］+；化合物 j：ESI-MS（m/z）：487.3［M+H］+；化合物 k：ESI-MS（m/z）：709.3［M+H］+；化合物 l：FAB-MS：418.2［M+H］+；化合物m：FAB-MS：496.2［M+H］+；化合物n：ESI-MS（m/z）：496.2［M+H］+；化合物 o：ESI-MS（m/z）：558.4［M+H］+；化合物p：ESI-MS（m/z）：545.3［M+H］+；化合物q：ESI-MS（m/z）：531.2［M+H］+。
2.2 反相高效液相色谱分析
洗脱试剂的配制：A液：取500 ml乙腈，加入500 μl三氟醋酸，混匀，抽滤2次。B液：取500 ml清新的超纯水，加入500 μl三氟醋酸，混匀，抽滤2次。色谱条款：柱温30℃，检测波长210 nm。
2.2.1 分析型高效液相色谱分析 样品的配制：取极少样品，溶于甲醇中。洗脱条款：溶剂A：0.1%TFA溶于100%乙腈，溶剂B：0.1%TFA溶于纯水，流速：1.0 ml/min，进样体积：20 μl。线形梯度洗脱条款见表1。
铁树，以其坚韧不拔、四季常青的特质，成为家居环境的首选植物。在堪舆学里，铁树象征着坚定不移的意志与不屈不挠的精神。
表1 分析型高效液相色谱洗脱梯度
2.2.2 制备型高效液相色谱分析 样品的配制：称取样品90 mg，溶于甲醇中，0.45 μm滤膜过滤。洗脱条款：流动相：乙腈∶水（0.1%三氟醋酸）=10∶90，流速：3.0 ml/min，进样体积：40 μl。详情接峰时技艺隔，最终所得峰液20 ml。将所得溶液经旋转挥发仪挥发，温度不跨越60℃。将溶液中的乙腈挥发干净后，转化至合适容器，使用冷冻干燥机将剩余溶液冻干。所得白色固体粉末为合成制备纯品。方针化合物分离纯化后，经高效液相分析，纯度均高于95%。
3 商讨
基于医学科学及药死亡学规划的潜入发展，近几十年发现了好多新的多肽化合物，它们在扼制肿瘤、抗感染、抗病毒、神经鼎新、免疫鼎新、内分泌调控等方面败露了较好的活性，为建造养息多样疾病的新式药物提供了渊博先导化合物。然则由于经典肽的结构在体本质易受到多样卵白酶的作用而剖析失活，见图3，因此仅有极端有限的自然多肽能平直行为药物使用。
图3 经典肽易受多样卵白酶的降解影响
然则，合成化学规划关于多肽药物的发展作念出了相配大的孝顺。不少历程化学修饰或改造的多肽，由于改善了生物利费用和代谢结识性而成为了药物养息中的“重磅炸弹”［4］。举例近十年，先后上市的肽类药物Sandostatin（octreotide，奥曲肽）、Integrilin（eptifibatide，依替非巴肽）、Goserelin（戈舍瑞林）、β-Casomorphin（酪啡肽）［5］等便是内源性小肽改构的见效代表。多肽结构改造战略因先导化合物的开始不同而异，基本神气见图4。
图4 先导肽结构改造战略
AcSDKP是一种极为贫乏的先导化合物，它不仅增殖扼制活性显赫，而况是内源性活性小肽，莫得毒反作用。唯有对其结构进行合理改造，在保留或提高原有活性的同期，增强其挣扎酶降解性能，提高生物利费用将有但愿发展成为一种新式造血干细胞保护药物，用于化学或辐射损害的防护，大致行为癌症养息的援救药物愚弄于临床。
通过对AcSDKP进行有用的结构改造和构效关系规划标明，以其它同性氨基酸替换原极性氨基酸，如以Glu替代Asp以及Arg替代Lys则活性减小。区别将Ser侧链羟基、Lys侧链氨基实施保护，而得到的四肽肖似物险些莫得活性，证据原序列中极性氨基酸的侧链基团极端紧迫，额外是Ser，而SDK是保抓活性的最引言列。推敲到AcSDKP的分子较小，聘请不同大小和极性的N-结尾保护基进行修饰，C-端Pro和N-端Ac对化合物活性影响不大。而况，通盘上述肖似物均不具有细胞毒性，因此可行为临床药物的后选化合物值得进一步规划。
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