许多真挚后台私信盘考类器官培养时基质胶如何去除，幸免基质胶侵略后续的wb、流式以及病理实际，那我亦然稽察了一些文件推出了我方的攻略，粗浅列位真挚鉴戒。 一、EDTA-PBS(心理去胶溶液)(浓度为1-5mM，具体浓度参照胶的浓度颐养) 使用递次： - 预冷溶液：使用前将EDTA-PBS置于4℃预冷。 - 解离样式： 1. 吸除培养基，加入预冷EDTA-PBS（体积狡饰类器官培养物）。 2. 冰上孵育30分钟（或4℃静置），技能轻摇培养皿援助基质胶融解。 3. 离心（300 ×g，5分钟）集合类器官，PBS洗涤2-3次。 二、Dispase酶溶液（酶解法解离基质胶）(1-2 U/mL（常用1 U/mL，凭证类器官耐受性颐养）。) 使用递次： - 解离样式： 1. 吸除培养基，加入预热的Dispase溶液（37℃）。 2. 37℃孵育10-20分钟（不雅察基质胶融解情况，幸免过度消化挫伤类器官）。 3. 加入等体积含血清的培养基绝交响应（血清扼制酶活性）。 4. 离心（200 ×g，迪士尼彩乐园官网25分钟），PBS洗涤2-3次。 三、其他替代试剂 1. Collagenase IV（胶原酶）： - 终浓度1-2 mg/mL，融解于PBS，37℃消化30-60分钟（恰当含胶原的基质胶）。 2. Accutase： - 奏凯使用商品化Accutase溶液，37℃孵育10-15分钟（讲默契离，恰当脆弱类器官）。 要津顾惜事项 1. 无菌操作： - 统共试剂需过滤除菌（EDTA-PBS/Dispase），幸免羞辱。 2. 类器官活性保护： - 落拓酶解时候，幸免过度消化导致细胞逝世（可通过台盼蓝染色检测活性）。 3. 残留基质胶检测： - 若洗涤后仍有胶状残留，可加多离心速率（500 ×g）或蔓延洗涤次数。 4. 温度敏锐性： - EDTA-PBS需预冷，Dispase需预热至37℃以进步恶果。 5. 试剂保存： - Dispase母液分装后-20℃保存，幸免反复冻融（活性亏本<10%）。 基质胶类器官基质胶去除实际样式猜度生医学类器官去除试剂
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